LeapWal PolyShooter 轉染試劑 P09110 是基于PEI(Polyethylenimine)的產品,因其有效的瞬轉效率和蛋白產量,已廣泛應用于工業化生產和基礎科研中的蛋白表達研究,年文獻發表量已達上千篇。PEI是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,每相隔二個碳原子,即每“第三個原子都是質子化的氨基氮原子,使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿”(proton sponge)體。PEI用作轉染試劑,將DNA縮聚成帶正電荷的復合物,這些復合物很容易通過內吞作用進入細胞。PEI-DNA復合物能很好地抵御溶酶體的降解作用,提高轉染效率。PEI轉染試劑能有效地將DNA轉染入HEK-293、CHO、COS、Hela、昆蟲(SF9、SF21)等真核細胞系,也可用于較大質粒的轉染。Polysciences目前主推三款不同市場定位的PEI轉染試劑。
LeapWal PolyShooter 轉染試劑 P09110轉染步驟:轉染前一天將細胞分至培養板,轉染當天細胞應50-80%融合。將細胞以1-3×105/2 ml接種于6孔板后孵育過夜將達到如此密度。將FuGENE6 Reagent在室溫孵育10-15分鐘。使用之前將FuGENE6顛倒混勻一下。
1. 在PCR管中加入不含血清和雙抗的營養液以稀釋FuGENE6,直至總體積到100 ul。
2. 將3-6 ul FuGENE6 Reagent直接加入營養液,輕彈管壁混合。
3. 加入1-2 ug的DNA溶液(0.02-2.0 ug/ul),輕彈管壁混合。
4. 室溫孵育20分鐘。
5. 將6孔板中的舊營養液吸出,加入約1 ml不含血清和雙抗的營養液洗滌一次,再加入2 ml不含血清和雙抗的營養液。
6. 將轉染復合物加入細胞,混勻使之均勻分布。
7. 3-8小時后,加入血清或換成含血清的營養液。